DELLA oqsillari saqlanib qolgan ustao'sish regulyatorlariichki va atrof-muhit belgilariga javoban o'simliklar rivojlanishini nazorat qilishda markaziy rol o'ynaydi. DELLA transkripsiya regulyatori vazifasini bajaradi va GRAS domeni orqali transkripsiya omillari (TF) va giston H2A bilan bog‘lanib, maqsadli promouterlarga jalb qilinadi. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, DELLA barqarorligi post-translational ravishda ikkita mexanizm orqali tartibga solinadi: gibberellin fitohormoni tomonidan qo'zg'atilgan poliubiquitinatsiya, bu uning tez degradatsiyasiga olib keladi va uning to'planishini oshirish uchun kichik ubiquitin o'xshash modifikatorlarning (SUMO) konjugatsiyasi. Bundan tashqari, DELLA faolligi ikki xil glikozillanish bilan dinamik ravishda tartibga solinadi: DELLA-TF o'zaro ta'siri O-fukosillanish orqali kuchayadi, lekin O-bog'langan N-asetilglyukosamin (O-GlcNAc) modifikatsiyasi bilan inhibe qilinadi. Biroq, DELLA fosforillanishining roli noaniq bo'lib qolmoqda, chunki oldingi tadqiqotlar fosforlanish DELLA degradatsiyasini rag'batlantiradigan yoki kamaytiradigan natijalardan tortib fosforlanish uning barqarorligiga ta'sir qilmasligini ko'rsatadigan qarama-qarshi natijalarni ko'rsatdi. Bu erda biz REPRESSORda fosforlanish joylarini aniqlaymizga1-3(RGA, AtDELLA) Arabidopsis thaliana dan massa spektrometriya tahlili orqali tozalangan va PolyS va PolyS / T mintaqalarida ikkita RGA peptidining fosforillanishi H2A ulanishini va RGA faolligini oshirishni ko'rsatadi. RGA ning maqsadli promouterlar bilan assotsiatsiyasi. Ta'kidlash joizki, fosforillanish RGA-TF o'zaro ta'siriga yoki RGA barqarorligiga ta'sir qilmaydi. Bizning tadqiqotimiz fosforillanish DELLA faolligini keltirib chiqaradigan molekulyar mexanizmni ochib beradi.
DELLA funktsiyasini tartibga solishda fosforlanishning rolini tushuntirish uchun in vivo DELLA fosforillanish joylarini aniqlash va o'simliklarda funktsional tahlillarni o'tkazish juda muhimdir. MS/MS tahlilidan so'ng o'simlik ekstraktlarini yaqinlik bilan tozalash orqali biz RGAda bir nechta fosfozitlarni aniqladik. GA etishmovchiligi sharoitida RHA fosforillanishi kuchayadi, ammo fosforillanish uning barqarorligiga ta'sir qilmaydi. Muhimi, ko-IP va ChIP-qPCR tahlillari RGA ning PolyS/T mintaqasidagi fosforillanish uning H2A bilan o'zaro ta'sirini va maqsadli promotorlar bilan bog'lanishini rag'batlantirishini va fosforlanishning RGA funktsiyasini induktsiya qilish mexanizmini ochib berishini aniqladi.
RGA LHR1 subdomenining TF bilan oʻzaro taʼsiri orqali maqsadli xromatinni olish uchun jalb qilinadi va keyin uning PolyS/T hududi va PFYRE subdomeni orqali H2A bilan bogʻlanadi va RGA barqarorligi uchun H2A-RGA-TF kompleksini hosil qiladi. DELLA domeni va GRAS domeni o'rtasidagi PolyS/T hududida Pep 2 ning noma'lum kinaz tomonidan fosforillanishi RGA-H2A bog'lanishini kuchaytiradi. Rgam2A mutant oqsili RGA fosforillanishini bekor qiladi va H2A bilan bog'lanishiga xalaqit berish uchun boshqa protein konformatsiyasini qabul qiladi. Bu vaqtinchalik TF-rgam2A o'zaro ta'sirining beqarorlashishiga va rgam2A ning maqsadli kromatindan ajralishiga olib keladi. Bu raqam faqat RGA vositachiligidagi transkripsiyaviy repressiyani tasvirlaydi. H2A-RGA-TF kompleksi maqsadli gen transkripsiyasiga yordam beradi va rgam2A ning defosforilatsiyasi transkripsiyani kamaytiradi, bundan tashqari, RGA vositachiligidagi transkripsiya faollashuvi uchun shunga o'xshash naqsh tasvirlanishi mumkin. Huang va boshqalardan o'zgartirilgan rasm.21.
Barcha miqdoriy ma'lumotlar Excel yordamida statistik tahlil qilindi va sezilarli farqlar Student's t testi yordamida aniqlandi. Namuna hajmini oldindan aniqlash uchun statistik usullar qo'llanilmadi. Tahlildan hech qanday ma'lumot chiqarib tashlanmadi; tajriba tasodifiy emas; tadqiqotchilar eksperiment davomida ma'lumotlarni taqsimlash va natijalarni baholash uchun ko'r emas edi. Namuna o'lchami rasm afsonasi va manba ma'lumotlar faylida ko'rsatilgan.
Tadqiqot dizayni haqida ko'proq ma'lumot olish uchun ushbu maqola bilan bog'liq bo'lgan Tabiiy portfel hisobotining qisqacha mazmuniga qarang.
Mass-spektrometriya proteomikasi ma'lumotlari PXD046004 ma'lumotlar to'plami identifikatori bilan PRIDE66 hamkorlar ombori orqali ProteomeXchange konsorsiumiga kiritildi. Ushbu tadqiqot davomida olingan barcha boshqa ma'lumotlar Qo'shimcha ma'lumotlar, qo'shimcha ma'lumotlar fayllari va xom ma'lumotlar fayllarida keltirilgan. Ushbu maqola uchun manba ma'lumotlari keltirilgan.
Xabar vaqti: 2024 yil 08-noyabr