DELLA oqsillari saqlanib qolgan usta hisoblanadio'sish regulyatorlariichki va atrof-muhit signallariga javoban o'simliklarning rivojlanishini boshqarishda markaziy rol o'ynaydi. DELLA transkripsiya regulyatori vazifasini bajaradi va transkripsiya omillari (TF) va GRAS domeni orqali H2A gistoniga bog'lanish orqali promotorlarni nishonga olish uchun jalb qilinadi. So'nggi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, DELLA barqarorligi post-translyatsion ravishda ikkita mexanizm orqali tartibga solinadi: fitohormon gibberellin tomonidan qo'zg'atilgan poliubiquitinatsiya, bu uning tez parchalanishiga olib keladi va uning to'planishini oshirish uchun kichik ubiquitinga o'xshash modifikatorlarning (SUMO) konjugatsiyalanishi. Bundan tashqari, DELLA faolligi ikki xil glikosilatsiya bilan dinamik ravishda tartibga solinadi: DELLA-TF o'zaro ta'siri O-fukosilatsiya bilan kuchayadi, lekin O-bog'langan N-atsetilglyukozamin (O-GlcNAc) modifikatsiyasi bilan inhibe qilinadi. Biroq, DELLA fosforillanishining roli noma'lumligicha qolmoqda, chunki oldingi tadqiqotlar qarama-qarshi natijalarni ko'rsatdi, fosforillanish DELLa parchalanishini kuchaytirishi yoki kamaytirishini ko'rsatuvchi natijalardan tortib, fosforillanish uning barqarorligiga ta'sir qilmasligini ko'rsatuvchi boshqalargacha. Bu yerda biz REPRESSORda fosforillanish joylarini aniqlaymiz.ga1-3(RGA, AtDELLA) Arabidopsis thaliana dan massa spektrometriyasi tahlili orqali tozalangan va PolyS va PolyS/T mintaqalarida ikkita RGA peptidining fosforillanishi H2A bog'lanishini va RGA faolligini oshirishini ko'rsatdi. RGA ning maqsadli promotorlar bilan bog'lanishi. Shunisi e'tiborga loyiqki, fosforillanish RGA-TF o'zaro ta'siriga yoki RGA barqarorligiga ta'sir qilmaydi. Bizning tadqiqotimiz fosforillanish DELLA faolligini qo'zg'atadigan molekulyar mexanizmni ochib beradi.
DELLA funktsiyasini tartibga solishda fosforillanishning rolini aniqlash uchun in vivo sharoitida DELLA fosforillanish joylarini aniqlash va o'simliklarda funktsional tahlillarni o'tkazish juda muhimdir. O'simlik ekstraktlarini affinlik bilan tozalash va keyin MS/MS tahlili orqali biz RGAda bir nechta fosfositlarni aniqladik. GA yetishmovchiligi sharoitida RHA fosforillanishi kuchayadi, ammo fosforillanish uning barqarorligiga ta'sir qilmaydi. Muhimi, co-IP va ChIP-qPCR tahlillari shuni ko'rsatdiki, RGA ning PolyS/T mintaqasida fosforillanish uning H2A bilan o'zaro ta'sirini va maqsadli promotorlar bilan bog'lanishini kuchaytiradi, bu esa fosforillanishning RGA funktsiyasini qo'zg'atish mexanizmini ochib beradi.
RGA LHR1 subdomenining TF bilan o'zaro ta'siri orqali xromatinni nishonga olish uchun jalb qilinadi va keyin PolyS/T mintaqasi va PFYRE subdomeni orqali H2A ga bog'lanadi va RGA ni barqarorlashtirish uchun H2A-RGA-TF kompleksini hosil qiladi. DELLA domeni va GRAS domeni orasidagi PolyS/T mintaqasida Pep 2 ning noma'lum kinaza tomonidan fosforillanishi RGA-H2A bog'lanishini kuchaytiradi. rgam2A mutant oqsili RGA fosforillanishini yo'q qiladi va H2A bog'lanishiga xalaqit berish uchun boshqa oqsil konformatsiyasini qabul qiladi. Bu vaqtinchalik TF-rgam2A o'zaro ta'sirining beqarorlashishiga va rgam2A ning maqsadli xromatindan ajralishiga olib keladi. Ushbu rasmda faqat RGA vositachiligidagi transkripsiya repressiyasi tasvirlangan. RGA vositachiligidagi transkripsiya faollashuvi uchun shunga o'xshash naqshni tasvirlash mumkin, faqat H2A-RGA-TF kompleksi maqsadli gen transkripsiyasini rag'batlantiradi va rgam2A ning defosforillanishi transkripsiyani kamaytiradi. Huang va boshqalardan o'zgartirilgan rasm.21.
Barcha miqdoriy ma'lumotlar Excel yordamida statistik tahlil qilindi va sezilarli farqlar Studentning t testi yordamida aniqlandi. Namuna hajmini oldindan aniqlash uchun hech qanday statistik usullar qo'llanilmadi. Tahlildan hech qanday ma'lumotlar chiqarib tashlanmadi; tajriba tasodifiy tanlanmagan; tadqiqotchilar tajriba davomida ma'lumotlarning taqsimlanishi va natijalarni baholashdan bexabar bo'lishmagan. Namuna hajmi rasm afsonasi va manba ma'lumotlari faylida ko'rsatilgan.
Tadqiqot dizayni haqida qo'shimcha ma'lumot olish uchun ushbu maqola bilan bog'liq Tabiiy portfel hisoboti qisqacha mazmuniga qarang.
Mass-spektrometriya proteomikasi ma'lumotlari PXD046004 ma'lumotlar to'plami identifikatoriga ega PRIDE66 hamkor ombori orqali ProteomeXchange konsorsiumiga taqdim etildi. Ushbu tadqiqot davomida olingan barcha boshqa ma'lumotlar Qo'shimcha ma'lumotlar, Qo'shimcha ma'lumotlar fayllari va Xom ma'lumotlar fayllarida keltirilgan. Manba ma'lumotlari ushbu maqola uchun taqdim etilgan.
Joylashtirilgan vaqt: 2024-yil 8-noyabr