O'simlik va patogen materiallari
Illinoys universitetida (hozirgi UC Davis universitetida) doktor Pat Braun tomonidan jo'xori konversiya populyatsiyasi (SCP) deb nomlanuvchi jo'xori assotsiatsiyasi xaritalash populyatsiyasi taqdim etildi. U ilgari tasvirlangan va AQSh muhitida o'simliklarning o'sishi va rivojlanishini osonlashtirish uchun fotoperiodga sezgir bo'lmagan va kichikroq bo'yli turli xil chiziqlar to'plamidir. Ushbu tadqiqotda ushbu populyatsiyadan 510 ta chiziq ishlatilgan, ammo yomon unib chiqish va boshqa sifat nazorati muammolari tufayli barcha chiziqlar uchta xususiyatni tahlil qilishda ishlatilmagan. Oxir-oqibat, xitin javobini tahlil qilish uchun 345 ta chiziqdan, flg22 javobi uchun 472 ta chiziqdan va TLS qarshiligi uchun 456 ta chiziqdan olingan ma'lumotlar ishlatilgan.B. cookeiLSLP18 shtammi Arkanzas universitetida doktor Burt Blumdan olingan.
MAMP javob o'lchovi
Ushbu tadqiqotda flg22 (Genscript katalogi # RP19986) va xitinning ikkita turli xil MAMPlari ishlatilgan. Sorghum o'simliklari issiqxonada tuproq (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) bilan to'ldirilgan tekisliklarga qo'yilgan qo'shimchalarda o'stirildi. O'simliklar namunalarni yig'ish kunida barglarning ortiqcha namlanishiga yo'l qo'ymaslik uchun namunalarni yig'ishdan bir kun oldin sug'orildi.
Chiziqlar tasodifiy tanlandi va logistika sabablariga ko'ra, 60 ta chiziqdan iborat partiyalarga ekildi. Har bir chiziq uchun har bir chiziq uchun ikkita urug'dan iborat uchta "idish" ekildi. Keyingi partiyalar avvalgi partiya qayta ishlangandan so'ng darhol butun populyatsiya baholanmaguncha ekildi. Ikkala MAMP uchun ham ikkita tajriba o'tkazildi, ikkala chiziqning har birida genotiplar qayta tasodifiy tanlandi.
ROS tahlillari avval tasvirlanganidek amalga oshirildi. Qisqacha aytganda, har bir chiziq uchun 3 xil idishga oltita urug' ekildi. Olingan ko'chatlardan uchtasi bir xillikka qarab tanlandi. G'ayrioddiy ko'rinadigan yoki ko'pchilikdan ancha uzunroq yoki kaltaroq ko'chatlar ishlatilmadi. Uch xil 15 kunlik jo'xori o'simliklarining 4-bargining eng keng qismidan diametri 3 mm bo'lgan to'rtta barg disklari ajratib olindi. Ikkita o'simlikdan har bir barg uchun bitta disk va bitta o'simlikdan ikkita disk, ikkinchi disk suv nazorati bo'ldi (pastga qarang). Disklar alohida-alohida 50 µl H2O ustida qora 96 teshikli plastinkada suzib yurdi, yorug'likka tushmaslik uchun alyuminiy muhr bilan yopildi va bir kechada xona haroratida saqlandi. Ertasi kuni ertalab 2 mg/ml xemilyuminestsent zondi L-012 (Wako, katalog raqami 120-04891), 2 mg/ml xren peroksidaza (VI-A turi, Sigma-Aldrich, katalog raqami P6782) va 100 mg/ml Xitin yoki 2 μM Flg22 yordamida reaksiya eritmasi tayyorlandi. Ushbu reaksiya eritmasidan 50 µl to'rtta quduqdan uchtasiga qo'shildi. To'rtinchi quduq sinov nazorati bo'lib, unga MAMPsiz reaksiya eritmasi qo'shildi. Har bir plastinkaga faqat suv solingan to'rtta bo'sh quduq ham kiritilgan.
Reaksiya eritmasi qo'shilgandan so'ng, lyuminestsentsiya SynergyTM 2 ko'p aniqlovchi mikroplastinka o'quvchi (BioTek) yordamida har 2 daqiqada 1 soat davomida o'lchandi. Plastinka o'quvchi ushbu 1 soat davomida har 2 daqiqada lyuminestsentsiya o'lchovlarini oladi. Har bir quduq uchun qiymatni berish uchun barcha 31 ta o'qishning yig'indisi hisoblab chiqildi. Har bir genotip uchun MAMP javobining taxminiy qiymati (uchta tajriba qudug'ining o'rtacha lyuminestsentsiya qiymati - namunaviy quduq qiymati) - o'rtacha bo'sh quduq qiymatidan minus sifatida hisoblandi. Bo'sh quduq qiymatlari doimiy ravishda nolga yaqin edi.
Barg disklariNicotiana benthamiana, sifatni nazorat qilish maqsadida har bir 96 quduqli plastinkaga bitta yuqori sezgir jo'xori liniyasi (SC0003) va bitta past sezgir jo'xori liniyasi (PI 6069) ham nazorat sifatida kiritilgan.
B. cookeiinokulyatsiya tayyorlash va emlash
B. cookeiInokulum avval ta'riflanganidek tayyorlandi. Qisqacha aytganda, jo'xori donalari uch kun davomida suvga botirildi, yuvildi, 1 litrli konussimon idishlarga solindi va 15 psi va 121 °C da bir soat davomida avtoklavda saqlandi. Keyin donalarga yangi kulturadan olingan taxminan 5 ml maseratsiyalangan miselyum qo'shildi.B. cookeiLSLP18 izolyati olinadi va xona haroratida 2 hafta davomida qoldiriladi, har 3 kunda kolbalar chayqatiladi. 2 haftadan so'ng, qo'ziqorin bilan zararlangan jo'xori donalari havoda quritiladi va keyin dala emlashgacha 4 °C da saqlanadi. Xuddi shu emlash butun sinov davomida ishlatilgan va har yili yangi tayyorlangan. Emlash uchun 4-5 haftalik jo'xori o'simliklarining bo'lagiga 6-10 ta zararlangan dona joylashtirildi. Bu zamburug'lardan hosil bo'lgan sporalar bir hafta ichida yosh jo'xori o'simliklarida infeksiyani keltirib chiqardi.
Urug'larni tayyorlash
Dalaga ekishdan oldin jo'xori urug'i tarkibida taxminan 1% Spirato 480 FS fungitsid, 4% Sebring 480 FS fungitsid, 3% Sorpro 940 ES urug' seyfeneri bo'lgan fungitsid, insektitsid va safener aralashmasi bilan ishlov berildi. Keyin urug'lar 3 kun davomida havoda quritildi, bu esa urug'lar atrofida bu aralashmaning yupqa qatlamini hosil qildi. Safener gerbitsid Dual Magnum ni unib chiqishdan oldin ishlov berishga imkon berdi.
Maqsadli barg dog'lariga chidamlilikni baholash
SCP 2017-yil 14-15-iyun va 2018-yil 20-iyun kunlari Shimoliy Karolina shtatining Kleyton shahridagi Markaziy ekinlarni tadqiq qilish stansiyasida tasodifiy to'liq blokli dizaynda ekilgan bo'lib, har bir holatda ikkita eksperimental replikatsiya mavjud. Tajribalar har bir uchastkada 10 ta urug'dan foydalanib, 1,8 m uzunlikdagi 0,9 m qator kengligidagi yakka qatorlarga ekilgan. Chegara ta'sirining oldini olish uchun har bir tajribaning chetiga ikkita chegara qatori ekilgan. Tajribalar 2017-yil 20-iyul va 2018-yil 20-iyul kunlari emlangan, bu vaqtda jo'xori o'simliklari 3-o'sish bosqichida bo'lgan. Baholar birdan to'qqizgacha bo'lgan shkala bo'yicha olingan bo'lib, bunda kasallik belgilari bo'lmagan o'simliklar to'qqiz ball, butunlay o'lgan o'simliklar esa bitta ball bilan baholangan. 2017-yilda ikkita baho va 2018-yilda har yili emlashdan ikki hafta o'tgach boshlanadigan to'rtta o'qish olingan. sAUDPC (kasallikning rivojlanish egri chizig'i ostidagi standartlashtirilgan maydon) avval tasvirlanganidek hisoblab chiqilgan.
Nashr vaqti: 2021-yil 1-aprel