Qarag'ay nematodi karantinli migratsiya endoparaziti bo'lib, qarag'ay o'rmonlari ekotizimlarida jiddiy iqtisodiy yo'qotishlarga olib kelishi ma'lum. Ushbu tadqiqotda halogenlangan indollarning qarag'ay nematodalariga qarshi nematisidal faolligi va ularning ta'sir qilish mexanizmi ko'rib chiqiladi. 5-iodoindol va avermektinning (ijobiy nazorat) qarag'ay nematodalariga qarshi nematisidal faolligi past konsentratsiyalarda (10 mkg / ml) o'xshash va yuqori edi. 5-yodoindol urug'lanishni, reproduktiv faollikni, embrion va lichinkalarning o'limini va harakatchanlikni pasaytirdi. Ligandlarning umurtqasiz hayvonlarga xos bo'lgan glutamat bilan qoplangan xlorid kanali retseptorlari bilan molekulyar o'zaro ta'siri 5-yodoindol, avermektin kabi, retseptorning faol joyiga mahkam bog'langan degan fikrni qo'llab-quvvatlaydi. 5-Iodoindol shuningdek, nematodalarda turli xil fenotipik deformatsiyalarni keltirib chiqardi, shu jumladan anormal organlarning qulashi / qisqarishi va vakuolizatsiyaning kuchayishi. Ushbu natijalar vakuolalar nematod metilatsiyasi orqali o'limda rol o'ynashi mumkinligini ko'rsatadi. Muhimi, 5-iodoindol ikkala o'simlik turiga (karam va turp) toksik bo'lmagan. Shunday qilib, ushbu tadqiqot shuni ko'rsatadiki, yodoindolni atrof-muhit sharoitida qo'llash qarag'ay so'lishining shikastlanishini nazorat qilishi mumkin.
Qarag'ay nematodasi (Bursaphelenchus xylophilus) qarag'ay o'rmonlari ekotizimlariga jiddiy ekologik zarar etkazishi ma'lum bo'lgan ko'chib yuruvchi endoparazit nematodalar (PWN) ga tegishli. Qarag'ay daraxti nematodidan kelib chiqqan qarag'ay so'lishi kasalligi (PWD) bir qancha qit'alarda, jumladan, Osiyo va Evropada jiddiy muammoga aylanib bormoqda va Shimoliy Amerikada nematoda qarag'ayning kirib kelgan turlarini yo'q qiladi1,2. Qarag'ay daraxtlarining kamayishi katta iqtisodiy muammo bo'lib, uning global tarqalish istiqboli tashvishga solmoqda3. Ko'pincha quyidagi qarag'ay turlari nematoda hujumiga uchraydi: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii va Pinus radiata4. Qarag'ay nematodi jiddiy kasallik bo'lib, infektsiyadan keyin bir necha hafta yoki oy ichida qarag'ay daraxtlarini o'ldirishi mumkin. Bundan tashqari, qarag'ay nematodalarining tarqalishi turli ekotizimlarda keng tarqalgan, shuning uchun doimiy infektsiya zanjirlari o'rnatilgan1.
Bursaphelenchus xylophilus - Aphelenchoidea super oilasiga va 102.5 sinfiga mansub karantin o'simlik-parazit nematoda. Nematoda zamburug'lar bilan oziqlanadi va qarag'ay daraxtlarining yog'och to'qimalarida ko'payadi, to'rt xil lichinka bosqichiga o'tadi: L1, L2, L3, L4 va katta yoshli shaxs1,6. Oziq-ovqat tanqisligi sharoitida qarag'ay nematodi ixtisoslashgan lichinka bosqichiga - dauerga o'tadi, bu uning vektori - qarag'ay po'stlog'i qo'ng'izini (Monochamus alternatus) parazit qiladi va sog'lom qarag'ay daraxtlariga o'tadi. Sog'lom xo'jayinlarda nematodalar tezda o'simlik to'qimalari orqali ko'chib o'tadi va parenximatoz hujayralar bilan oziqlanadi, bu esa infektsiyadan keyin bir yil ichida bir qator yuqori sezuvchanlik reaktsiyalariga, qarag'ayning so'lib ketishiga va o'limga olib keladi1,7,8.
Qarag'ay nematodalariga qarshi biologik kurash uzoq vaqtdan beri qiyin bo'lib kelgan, karantin choralari 20-asrdan boshlangan. Qarag'ay nematodalarini nazorat qilish bo'yicha joriy strategiyalar, birinchi navbatda, kimyoviy ishlov berish, shu jumladan yog'ochni fumigatsiya qilish va nematsidlarni daraxt tanasiga joylashtirishni o'z ichiga oladi. Eng ko'p ishlatiladigan nematsidlar avermektinlar oilasiga mansub avermektin va avermektin benzoatdir. Ushbu qimmat kimyoviy moddalar ko'plab nematoda turlariga qarshi yuqori samarali va ekologik xavfsiz hisoblanadi9. Biroq, bu nematsidlarni qayta-qayta ishlatish seleksiya bosimini yaratishi kutilmoqda, bu deyarli chidamli qarag'ay nematodalarining paydo bo'lishiga olib keladi, bu Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella va Trichostrongylus colubriformis va Ostertagia nematodalari kabi bir qancha hasharotlar uchun ko'rsatilgandek, ular gradusli qarshilik ko'rsatadi. avermektinlar 10,11,12. Shuning uchun qarshilik naqshlarini muntazam ravishda o'rganish va PVDni nazorat qilish uchun muqobil, tejamkor va ekologik toza choralarni topish uchun doimiy ravishda nematsidlarni tekshirish kerak. So'nggi o'n yilliklarda bir qator mualliflar nematodalarni nazorat qilish agentlari sifatida o'simlik ekstraktlari, efir moylari va uchuvchi moddalardan foydalanishni taklif qilishdi13,14,15,16.
Biz yaqinda Caenorhabditis elegans 17 da hujayralararo va qirolliklararo signalizatsiya molekulasi bo'lgan indolning nematisidal faolligini ko'rsatdik. Indol mikrobial ekologiyada keng tarqalgan hujayra ichidagi signal bo'lib, mikrobial fiziologiyaga, spora shakllanishiga, plazmid barqarorligiga, dori qarshiligiga, biofilm shakllanishiga va virulentlikka ta'sir qiluvchi ko'plab funktsiyalarni nazorat qiladi 18, 19. Indol va uning hosilalari boshqa patogen nematodalarga nisbatan faolligi o'rganilmagan. Ushbu tadqiqotda biz 34 ta indolning qarag'ay nematodalariga qarshi nematisidal faolligini o'rganib chiqdik va mikroskopiya, vaqt oralig'ida suratga olish va molekulyar o'rnatish tajribalari yordamida eng kuchli 5-iyodoindolning ta'sir qilish mexanizmini aniqladik va uning o'simliklarga toksik ta'sirini urug'larning unib chiqishi tahlili yordamida baholadik.
Indolning yuqori konsentratsiyasi (>1,0 mM) nematodalarga nematisidal ta'sir ko'rsatishi haqida avval xabar berilgan edi17. B. xylophilus (aralash hayot bosqichlari) 1 mM da indol yoki 33 xil indol hosilalari bilan davolashdan so'ng, B. xylophilusning o'lim darajasi nazorat va davolash qilingan guruhlardagi tirik va o'lik nematodalarni hisoblash orqali o'lchandi. Beshta indol muhim nematisidal faollikni namoyish etdi; davolanmagan nazorat guruhining omon qolishi 24 soatdan keyin 95 ± 7% ni tashkil etdi. Sinov qilingan 34 ta indoldan 1 mM da 5-yodoindol va 4-ftorindol 100% o'limga olib keldi, 5,6-diftorindigo, metilindol-7-karboksilat va 7-yodoindol esa taxminan 50% o'limga olib keldi (1-jadval).
5-iyodoindolning vakuol hosil bo'lishiga va qarag'ay nematodining metabolizmiga ta'siri. (A) avermektin va 5-yodoindolning kattalar erkak nematodalariga ta'siri, (B) L1 bosqich nematoda tuxumlari va (C) B. xylophilusning metabolizmi, (i) vakuolalar 0 soatda kuzatilmadi, davolash natijasida (ii) vakuolalar, (iii) vakuolalar, (iii) vakuolalarning to'planishi, ko'p vakuolalar (vakuolalar) to'planishi (ii) vakuolalarning birlashishi va (vi) gigant vakuolalarning hosil bo'lishi. Qizil o'qlar vakuolalarning shishishini, ko'k o'qlar vakuolalarning birlashishini va qora o'qlar ulkan vakuolalarni ko'rsatadi. O'lchov paneli = 50 mkm.
Bundan tashqari, ushbu tadqiqot, shuningdek, qarag'ay nematodalarida metan tufayli o'limning ketma-ket jarayonini tasvirlab berdi (4C-rasm). Metanogen o'lim - taniqli sitoplazmatik vakuolalarning to'planishi bilan bog'liq bo'lgan hujayra o'limining apoptotik bo'lmagan turi27. Qarag'ay nematodalarida kuzatilgan morfologik nuqsonlar metandan kelib chiqqan o'lim mexanizmi bilan chambarchas bog'liq. Turli vaqtlarda mikroskopik tekshirish shuni ko'rsatdiki, 5-yodoindol (0,1 mM) ta'siridan 20 soat keyin ulkan vakuolalar hosil bo'ladi. Mikroskopik vakuolalar 8 soat davolashdan keyin kuzatildi va 12 soatdan keyin ularning soni ortdi. 14 soatdan keyin bir nechta katta vakuolalar kuzatildi. Davolanishdan 12-16 soat o'tgach, bir nechta eritilgan vakuolalar aniq ko'rindi, bu vakuol sintezi metanogen o'lim mexanizmining asosi ekanligini ko'rsatadi. 20 soatdan keyin qurt bo'ylab bir nechta ulkan vakuolalar topildi. Ushbu kuzatishlar C. elegans'da metuozning birinchi hisobotini ifodalaydi.
5-yodoindol bilan ishlov berilgan chuvalchanglarda vakuolalar yigʻilishi va yorilishi ham kuzatilgan (5-rasm), bu chuvalchangning egilishi va atrof-muhitga vakuollarning chiqishidan dalolat beradi. Tuxum qobig'ining membranasida ham vakuollarning buzilishi kuzatildi, bu odatda inkubatsiya paytida L2 tomonidan saqlanib qoladi (qo'shimcha rasm S2). Ushbu kuzatishlar suyuqlik to'planishi va osmoregulyatsiya etishmovchiligi, shuningdek, vakuolalar hosil bo'lishi va yiringlash jarayoniga qaytariladigan hujayra shikastlanishi (RCI) ishtirokini qo'llab-quvvatlaydi (5-rasm).
Kuzatilgan vakuol shakllanishida yodning rolini gipoteza qilib, biz natriy yodid (NaI) va kaliy yodid (KI) ning nematisidal faolligini tekshirdik. Biroq, kontsentratsiyalarda (0,1, 0,5 yoki 1 mM) ular nematodlarning omon qolishiga yoki vakuol shakllanishiga ta'sir ko'rsatmadi (qo'shimcha rasm. S5), garchi 1 mM KI ozgina nematisidal ta'sir ko'rsatdi. Boshqa tomondan, 7-yodoindol (1 yoki 2 mM), 5-yodoindol kabi, bir nechta vakuolalar va strukturaviy deformatsiyalarni keltirib chiqardi (Qo'shimcha rasm S6). Ikki yodoindol qarag'ay nematodalarida o'xshash fenotipik xususiyatlarni ko'rsatdi, NaI va KI esa yo'q. Qizig'i shundaki, indol B. xylophilusda sinovdan o'tgan konsentratsiyalarda vakuol hosil bo'lishiga olib kelmadi (ma'lumotlar ko'rsatilmagan). Shunday qilib, natijalar indol-yod kompleksi B. xylophilusning vakuolizatsiyasi va metabolizmi uchun javobgar ekanligini tasdiqladi.
Nematisidal faollik uchun sinovdan o'tgan indollar orasida 5-iyodoindol eng yuqori sirpanish indeksiga ega -5,89 kkal/mol, undan keyin 7-yodoindol (-4,48 kkal/mol), 4-ftorindol (-4,33) va indol (-4,03) (6-rasm). 5-yodoindolning leysin 218 bilan kuchli magistral vodorod bog'lanishi uning bog'lanishini barqarorlashtiradi, boshqa barcha indol hosilalari esa yon zanjirli vodorod aloqalari orqali serin 260 bilan bog'lanadi. Boshqa modellashtirilgan yodoindollar orasida 2-iyodoindolning bog'lanish qiymati -5,248 kkal/mol, bu uning leysin 218 bilan asosiy vodorod bog'lanishiga bog'liq. Boshqa ma'lum bog'lanishlarga 3-iyodoindol (-4,3 kkal/mol), 4-iyodoindol (-4,0 kkal/mol) va (-4,0 kkal/mol) kiradi. kkal/mol) (qo‘shimcha S8-rasm). Ko'pgina halogenlangan indollar va indolning o'zi, 5-iyodoindol va 2-yodoindoldan tashqari, serin 260 bilan bog'lanish hosil qiladi. Leysin 218 bilan vodorod bog'lanishi ivermektin uchun kuzatilganidek, retseptor-ligandning samarali bog'lanishidan dalolat beradi (Qo'shimcha Fig-iodoindol). 2-yodoindol, ivermektin kabi, leysin 218 orqali GluCL retseptorlarining faol joyiga mahkam bog'lanadi (6-rasm va qo'shimcha rasm S8). Biz taklif qilamizki, bu bog'lanish GluCL kompleksining ochiq gözenek tuzilishini saqlab qolish uchun zarur va GluCL retseptorlari, 5-iyodoindol, 2-iodoindol, avermektin va ivermektinning faol joyiga mahkam bog'lanib, ion kanalini ochiq holda ushlab turish va suyuqlikni qabul qilish imkonini beradi.
Indol va halogenlangan indolning GluCL ga molekulyar biriktirilishi. (A) indol, (B) 4-ftorindol, (C) 7-iyodoindol va (D) 5-yodoindol ligandlarining GluCL faol joyiga bog'lanish yo'nalishlari. Protein lenta bilan ifodalanadi va magistral vodorod aloqalari sariq nuqta chiziqlar sifatida ko'rsatilgan. (A'), (B'), (C') va (D') mos keladigan ligandlarning atrofdagi aminokislotalar qoldiqlari bilan o'zaro ta'sirini ko'rsatadi va yon zanjirli vodorod aloqalari pushti nuqtali o'qlar bilan ko'rsatilgan.
5-yodoindolning karam va turp urug'larining unib chiqishiga toksik ta'sirini baholash uchun tajribalar o'tkazildi. 5-yodoindol (0,05 yoki 0,1 mM) yoki avermektin (10 mkg/ml) boshlang‘ich unib chiqishi va o‘simliklarning paydo bo‘lishiga kam ta’sir ko‘rsatgan yoki umuman ta’sir ko‘rsatmagan (7-rasm). Bundan tashqari, ishlov berilmagan nazorat turlari va 5-iodoindol yoki avermektin bilan ishlov berilgan urug'larning unib chiqish tezligi o'rtasida sezilarli farq topilmadi. 5-yodoindolning 1 mM (uning faol konsentratsiyasidan 10 marta) lateral ildizlarning rivojlanishini biroz kechiktirgan bo'lsa-da, ildizlarning cho'zilishi va hosil bo'lgan lateral ildizlar soniga ta'siri ahamiyatsiz edi. Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, 5-iodoindol o'simlik hujayralari uchun toksik emas va o'rganilgan konsentratsiyalarda o'simliklarning rivojlanish jarayonlariga xalaqit bermaydi.
5-yodoindolning urug'larning unib chiqishiga ta'siri. Murashige va Skoog agar muhitida B. oleracea va R. raphanistrum urug'larining avermektin yoki 5-iyodoindol bilan yoki bo'lmagan holda unib chiqishi, unib chiqishi va lateral ildiz otishi. Nihol 22 ° C da 3 kunlik inkubatsiyadan keyin qayd etilgan.
Ushbu tadqiqot indollar tomonidan nematodlarni o'ldirishning bir nechta holatlari haqida xabar beradi. Muhimi, bu qarag‘ay ignalarida yodoindolning metillanishini keltirib chiqaradigan (kichik vakuolalarning asta-sekin ulkan vakuolalarga birlashishi natijasida yuzaga keladigan jarayon, oxir-oqibat membrana yorilishi va o‘limga olib kelishi) haqida birinchi hisobot bo‘lib, iyodoindol tijorat nematizidiga o‘xshash muhim nematisidal xususiyatlarga ega.
Ilgari indollar prokaryotlar va eukaryotlarda ko'plab signalizatsiya funktsiyalarini bajarishi haqida xabar berilgan edi, shu jumladan biofilmning inhibisyonu / shakllanishi, bakterial omon qolish va patogenlik19,32,33,34. So'nggi paytlarda halogenlangan indollar, indol alkaloidlari va yarim sintetik indol hosilalarining potentsial terapevtik ta'siri keng ko'lamli tadqiqot qiziqishlarini jalb qildi35,36,37. Masalan, galogenlangan indollar Escherichia coli va Staphylococcus aureus hujayralarini o'ldiradi37. Bundan tashqari, halogenlangan indollarning boshqa turlar, avlodlar va qirolliklarga nisbatan samaradorligini o'rganish ilmiy qiziqish uyg'otadi va bu tadqiqot ushbu maqsadga erishish yo'lidagi qadamdir.
Bu erda biz qayta tiklanadigan hujayra shikastlanishi (RCI) va metilatsiyaga asoslangan C. elegansda 5-iyodoindol tomonidan qo'zg'atilgan o'lim mexanizmini taklif qilamiz (4C va 5-rasm). Shishish va vakuolyar degeneratsiya kabi shishgan o'zgarishlar RCI va metilatsiyaning ko'rsatkichlari bo'lib, sitoplazmadagi yirik vakuolalar sifatida namoyon bo'ladi48,49. RCI energiya ishlab chiqarishga aralashib, ATP ishlab chiqarishni kamaytiradi, ATPase nasosining ishlamay qolishiga olib keladi yoki hujayra membranalarini buzadi va Na +, Ca2 + va suvning tez oqimini keltirib chiqaradi50,51,52. Hayvon hujayralarida Ca2+ va suvning kirib kelishi natijasida sitoplazmada suyuqlik to'planishi natijasida intrasitoplazmatik vakuolalar paydo bo'ladi53. Qizig'i shundaki, agar shikastlanish vaqtinchalik bo'lsa va hujayralar ma'lum vaqt davomida ATP ishlab chiqara boshlasa, hujayra shikastlanishining bu mexanizmi qayta tiklanadi, ammo zarar davom etsa yoki yomonlashsa, hujayralar nobud bo'ladi.54 Bizning kuzatishlarimiz shuni ko'rsatadiki, 5-yodoindol bilan davolangan nematodalar stressli sharoitlarga ta'sir qilgandan keyin normal biosintezni tiklay olmaydi.
B. xylophilusda 5-yodoindol tomonidan qo'zg'atilgan metillanish fenotipi yod mavjudligi va uning molekulyar taqsimlanishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin, chunki 7-yodoindol B. xylophilusga 5-yodoindolga qaraganda kamroq inhibitiv ta'sir ko'rsatdi (1-jadval va qo'shimcha rasm S6). Bu natijalar Malta va boshqalarning tadqiqotlariga qisman mos keladi. (2014), indoldagi piridil azot qismini para-pozitsiyadan meta-pozitsiyaga ko'chirish U251 hujayralarida vakuolizatsiya, o'sishni inhibe qilish va sitotoksiklikni bekor qilganligi haqida xabar berib, molekulaning oqsildagi ma'lum bir faol joy bilan o'zaro ta'siri juda muhim ekanligini ko'rsatadi27,44,45. Ushbu tadqiqotda kuzatilgan indol yoki halogenlangan indollar va GluCL retseptorlari o'rtasidagi o'zaro ta'sirlar ham ushbu tushunchani qo'llab-quvvatlaydi, chunki 5 va 2-yodoindol GluCL retseptorlari bilan tekshirilgan boshqa indollarga qaraganda kuchliroq bog'lanishi aniqlandi (6-rasm va qo'shimcha rasm S8). Indolning ikkinchi yoki beshinchi pozitsiyasidagi yod magistral vodorod aloqalari orqali GluCL retseptorining leytsin 218 bilan bog'lanishi aniqlandi, boshqa halogenlangan indollar va indolning o'zi esa serin 260 bilan zaif yon zanjirli vodorod aloqalarini hosil qiladi (6-rasm). Shuning uchun biz taxmin qilamizki, halogenning lokalizatsiyasi vakuolyar degeneratsiyani qo'zg'atishda muhim rol o'ynaydi, 5-iyodoindolning qattiq bog'lanishi esa ion kanalini ochiq holda ushlab turadi va shu bilan tez suyuqlik oqimi va vakuol yorilishi imkonini beradi. Biroq, 5-iyodoindolning batafsil ta'sir mexanizmini aniqlash kerak.
5-yodoindolni amaliy qo'llashdan oldin uning o'simliklarga toksik ta'sirini tahlil qilish kerak. Urug‘larning unib chiqishi bo‘yicha o‘tkazilgan tajribalarimiz shuni ko‘rsatdiki, 5-yodoindol o‘rganilgan konsentratsiyalarda urug‘ning unib chiqishiga yoki keyingi rivojlanish jarayonlariga salbiy ta’sir ko‘rsatmaydi (7-rasm). Shunday qilib, ushbu tadqiqot qarag'ay nematodalarining qarag'ay daraxtlariga zararli ta'sirini nazorat qilish uchun ekologik muhitda 5-iodoindoldan foydalanish uchun asos yaratadi.
Oldingi hisobotlar shuni ko'rsatdiki, indolga asoslangan terapiya antibiotiklarga qarshilik va saraton rivojlanishi muammosini hal qilish uchun potentsial yondashuvdir55. Bundan tashqari, indollar antibakterial, saratonga qarshi, antioksidant, yallig'lanishga qarshi, diabetga qarshi, virusga qarshi, antiproliferativ va silga qarshi ta'sirga ega va dori ishlab chiqarish uchun istiqbolli asos bo'lib xizmat qilishi mumkin56,57. Ushbu tadqiqot birinchi marta yoddan antiparazitik va anthelmintic agent sifatida foydalanishni taklif qiladi.
Avermektin o'ttiz yil oldin kashf etilgan va 2015 yilda Nobel mukofotiga sazovor bo'lgan va uni anthelmintic sifatida ishlatish hali ham faol davom etmoqda. Biroq, nematodalar va hasharotlar zararkunandalarida avermektinlarga qarshilikning tez rivojlanishi tufayli qarag'ay daraxtlarida PWN infektsiyasini nazorat qilish uchun muqobil, arzon va ekologik xavfsiz strategiya zarur. Ushbu tadqiqot, shuningdek, 5-iyodoindol qarag'ay nematodalarini o'ldiradigan mexanizm va 5-iyodoindolning o'simlik hujayralari uchun past toksikligi haqida xabar beradi, bu esa kelajakda tijorat maqsadlarida qo'llanilishi uchun yaxshi istiqbollarni ochadi.
Barcha eksperimentlar Yeungnam universiteti Etika qo‘mitasi tomonidan tasdiqlangan, Kyonsan, Koreya va usullar Yeungnam universiteti axloq qo‘mitasining ko‘rsatmalariga muvofiq amalga oshirilgan.
Tuxumni inkubatsiya qilish tajribalari belgilangan tartib-qoidalar yordamida amalga oshirildi43. Chiqish tezligini (HR) baholash uchun 1 kunlik kattalar nematodalari (taxminan 100 urg'ochi va 100 erkak) qo'ziqorinni o'z ichiga olgan Petri idishlariga o'tkazildi va 24 soat davomida o'sishiga ruxsat berildi. Keyin tuxumlar ajratildi va steril distillangan suvda suspenziya sifatida 5-iyodoindol (0,05 mM va 0,1 mM) yoki avermektin (10 mkg / ml) bilan ishlov berildi. Ushbu suspenziyalar (500 mkl; taxminan 100 tuxum) 24 quduqli to'qima madaniyati plastinkasining quduqlariga o'tkazildi va 22 ° C da inkubatsiya qilindi. L2 soni 24 soatlik inkubatsiyadan so'ng amalga oshirildi, ammo agar hujayralar nozik platinali sim bilan qo'zg'atilganda harakat qilmasa, o'lik deb hisoblanadi. Ushbu tajriba ikki bosqichda o'tkazildi, har biri olti marta takrorlandi. Ikkala tajribadan olingan ma'lumotlar birlashtirildi va taqdim etildi. HR ulushi quyidagicha hisoblanadi:
Lichinkalarning o'limi oldindan ishlab chiqilgan protseduralar yordamida baholandi. Nematod tuxumlari yig'ildi va embrionlar L2 bosqichli lichinkalarni yaratish uchun steril distillangan suvda inkubatsiya qilish orqali sinxronlashtirildi. Sinxronlashtirilgan lichinkalar (taxminan 500 nematod) 5-yodoindol (0,05 mM va 0,1 mM) yoki avermektin (10 mkg / ml) bilan ishlov berildi va B. cinerea Petri plitalarida o'stirildi. 22 ° C da 48 soat inkubatsiyadan so'ng, nematodlar steril distillangan suvda to'plangan va L2, L3 va L4 bosqichlari mavjudligi uchun tekshirilgan. L3 va L4 bosqichlarining mavjudligi lichinkalarning o'zgarishini ko'rsatdi, L2 bosqichining mavjudligi esa transformatsiyaning yo'qligini ko'rsatdi. Tasvirlar iRiS™ raqamli hujayra tasvirlash tizimi yordamida olingan. Ushbu tajriba ikki bosqichda o'tkazildi, har biri olti marta takrorlandi. Ikkala tajribadan olingan ma'lumotlar birlashtirildi va taqdim etildi.
5-iodoindol va avermektinning urug'larga toksikligi Murashige va Skoog agar plastinkalarida unib chiqish testlari yordamida baholandi.62 B. oleracea va R. raphanistrum urug'lari birinchi marta steril distillangan suvda bir kun davomida namlangan, 1 ml 100% tijorat etanol bilan yuvilgan, shuning uchun sterillangan ml 1% 3 bilan sterillangan. gipoxlorit) 15 daqiqa, va 1 ml steril suv bilan besh marta yuviladi. Keyin sterillangan urug'lar 0,86 g/l (0,2X) Murashige va Skoog muhiti va 5-yodoindol yoki avermektin bilan yoki bo'lmagan 0,7% bakteriologik agar o'z ichiga olgan unib chiquvchi agar plastinkalariga bosildi. Keyin plitalar 22 ° C da inkubatsiya qilindi va tasvirlar 3 kunlik inkubatsiyadan keyin olingan. Ushbu tajriba ikki bosqichda o'tkazildi, ularning har biri olti marta takrorlandi.
Xabar vaqti: 26-fevral-2025